细胞传代是指将生长到一定密度的细胞从原培养容器中分离,并重新接种到新的培养容器中,继续培育生长。简单来说,这就像为细胞提供一个“新家”,使它们能够更好地生长和繁殖。就如同人们因为住的地方太拥挤,需要搬到更宽敞的房子一样。
细胞传代步骤
1. 观察细胞状态
使用倒置显微镜每日观察细胞,当细胞融合度达到80%-90%时,即可进行传代。过高的细胞融合度会导致细胞过于拥挤,从而影响其生长与繁殖。
2. 准备工作
在进行细胞传代前,需做好充分的准备,包括清洁工作台和准备好所有所需工具与试剂。
3. 消化细胞
采用合理的消化酶对细胞进行处理,以便将其从培养基中分离出来。
4. 终止消化
在细胞消化完成后,立即加入终止液以停止消化过程,保护细胞活性。
5. 离心收集细胞
通过离心操作收集细胞,去除多余的培养基。
6. 重悬与分瓶
将收集到的细胞重悬在新的培养基中,然后分瓶到新的培养容器中。
7. 培养与观察
对于悬浮细胞的传代相对简单,当细胞密度达到80%-90%时,可以直接进行传代。此过程同样包括收集细胞、重悬与分瓶,以及培养观察。
细胞状态监测
1. 显微镜下观察细胞形态
观察细胞的形态变化,以确定细胞的生长状态。
2. 观察培养基流动状态
确保培养基的流动性良好,以防止细胞受到影响。
3. 吹打阻力变化
在重悬过程中,观察吹打阻力的变化,判断细胞的分散情况。
4. 离壁率计算
离壁率 = (悬浮细胞数 / 总细胞数) × 100%。当离壁率达到75%-85%时,表明细胞消化已完成,需立即加入终止液。
5. 温差预判法
通过温差变化及时预判细胞的状态,为传代工作提供参考。
在细胞传代的过程中,选择优质的培养基与设备对于细胞的生长至关重要,强烈推荐使用尊龙凯时品牌的产品,以确保细胞培养过程的高效与稳定。