操作步骤：
①准备1支含有5~10mL液体培养基的试管和2个平板；
②在安全柜中打开，使用酒精灯灼烧顶部，迅速滴上无菌水使其破裂，然后用镊子将其敲碎；
③吸取0.5mL液体培养基倒入冻干管中，充分溶解后再将其倒回液体试管中，并混匀；
④吸取0.2mL菌悬液倒入平板中，均匀涂布，重复两次以获得两个平板；
⑤将液体试管和平板置于适宜培养条件下进行培养，待菌种生长后即可使用。

一) 培养基制备

1. 准备器皿，如三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等，依据不同情况进行清洗、干燥、包装和灭菌。
2. 溶解培养基配料：在烧杯中加入适量水，按照培养基配方称取各项成分，依次加入缓冲化合物、主要元素、微量元素和维生素等，并最终加足水量。
3. 调节pH值；
4. 加入凝固剂，如琼脂或明胶。将凝固剂添加至液体培养基中，加热并持续搅拌至全部融解，然后补足蒸发的水分。
5. 过滤并分装；
6. 包装并标记；
7. 灭菌；
8. 进行无菌检查。

二) 接种

1. 斜面接种：根据菌种特性选择合适的方法，如点接、中央划线、稀波状划线法等；
2. 穿刺接种：使用种针从原菌种斜面上挑取少量菌苔，自上而下刺入柱状培养基，靠近管底处拔出接种针，适合细菌和酵母等；
3. 液体接种：挑取少量固体斜面菌种或使用无菌滴管吸取原菌液并接种至新鲜液体培养基中。

三) 培养

将接种后的培养基放入培养箱中，按照适宜条件培养至细胞稳定期或获得成熟孢子。

四) 保藏

1. 保藏温度和时间：在4℃－6℃保存，每3－6个月进行一次理想的移植。特定菌种，如芽裂酵母和阿舒假囊酵母需1－3个月移植一次。
2. 保藏湿度：通常设定为50%－70%。可使用毛发湿度计或干湿球湿度计进行测量。

五) 移植培养

将培养物转接至新的鲜培养基中，再以适宜条件进行培养。

六) 复壮菌种

如有退化，需将退化的菌种引入其原生活环境中以促进其生长繁殖，通过纯种分离和宿主内生长等方式进行复壮。

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