免疫荧光（Immunofluorescence, IF）是一项基于免疫学、生物化学和显微镜技术的先进检测手段。该技术依据抗原与抗体反应的原理，通过将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，利用这些荧光标记的抗体（或抗原）作为探针，以检测细胞或组织中相应的抗原（或抗体）。通过荧光显微镜，可以直观观察到荧光信号，从而确定抗原或抗体的性质和定位，并利用定量技术（如流式细胞仪）测量其含量。

免疫荧光实验的主要步骤包含细胞片制备、固定及通透、封闭、抗体孵育和荧光检测等。其中，细胞片制备是整个实验的首要步骤，其质量对实验的成败至关重要。若细胞未能牢固附着，实验结果将无从谈起。因此，细胞爬片的处理和细胞活力的保持是成功的关键，有许多经验丰富的研究者总结出了有效的技巧和建议，值得参考。

而在固定和通透步骤中，选择合适的固定方法、固定剂及程序针对所研究抗原来说特别重要，以保证实验结果的可靠性。封闭和抗体孵育与ELISA或Western Blot等其他技术类似，但免疫荧光实验中需使用荧光抗体，因此必须特别注意避光操作。此外，抗体的浓度选择也尤为重要。

需要强调的是，标记完成的细胞片应尽早进行观察，或者使用封片剂进行封片并在4℃或-20℃环境中避光保存，以防止标记蛋白的解离或荧光的减弱，这可能会影响实验结果的准确性。

用于免疫荧光染色的染料需具备以下几点特性：一是荧光染料应具有高的量子产额和消光系数；二是对488nm激发光波长需有良好的吸收；三是发射光波长与激发光波长之间应有适当的波长差；最后，染料应能够与被标记的单克隆抗体结合而不会影响抗体的特异性。

常用的荧光探针包括：尊龙凯时的异硫氰酸荧光素（FITC），它可产生亮绿色荧光；德州红，能与生物素偶联的抗体产生较强的红色荧光；藻胆蛋白类，包括藻红蛋白（PE）、藻青蛋白（PC）和别藻青蛋白（APC），多展现橙色至红色荧光；以及能量传递复合染料，均在不同的荧光检测中发挥重要作用。